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內毒素檢測鱟試劑盒 (微板定量顯色基質法)使用說明書

 發布時間:2020-12-04 點擊量:165

內毒素檢測鱟試劑盒 (微板定量顯色基質法)使用說明書
【檢測限】
【用途】
【原理】
【貯存】2~8℃,避光貯存。
【用法】
【試劑盒組成】
表1 內毒素標準溶液配制
表2 內毒素標準溶液配制
0.1 0.25 0.5 1 內毒素濃度(EU/ml)
0.6 0.5 0 加細菌內毒素檢查用水(ml) 1.8
0.2 0.2 0.5 1 加1EU/ml內毒素溶液(ml)
0.01 0.025 0.05 0.1 內毒素濃度(EU/ml)
0.9 0.6 0.5 0 加細菌內毒素檢查用水(ml)
0.1 0.2 0.5 1 加0.1EU/ml內毒素溶液(ml)
顯色基質鱟試劑(End-point Chromogenic Tachypleus Amebocyte 
Lysate,EC TAL)用于體外細菌內毒素的定量檢測,禁止以任何途徑進
入機體。 
鱟試劑為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑
中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下
(溫度,pH值及無干擾物質),細菌內毒素激活C 因子,引起一系列酶
促反應,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質,
使其分解為多肽和黃色的對硝基苯胺(pNA,λ =405nm)。在一定
時間內,pNA的生成量與細菌內毒素濃度成正相關,據此,可以定量供
試品的內毒素濃度。
1 . 材料和設備
1.1 試劑(試劑盒配套)
鱟試劑、細菌內毒素工作標準品、顯色基質、反應終止劑、細菌內毒素
檢查用水。
1.2 器材
試劑盒配套:
無熱原96孔板(MPC96)、微板架。
鱟試劑、細菌內毒素工作標準品、顯色基質、反應終止劑、細菌內毒素
檢查用水
2. 供試品的預處理及注意事項
2.1 供試品與鱟試劑混合后的溶液的pH值應在6.0~8.0之間,若超出此
范圍,需用無熱原緩沖液、0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸調節。
2.2 若供試品中可能存在鱟試驗的干擾物質,處理參見【供試品的干擾
試驗】。
2.3 若供試品中可能含有β-葡聚糖(β-葡聚糖會產生G因子旁路反
應,干擾內毒素檢測),需選用特異性鱟試劑(我司提供)。
3. 實驗操作
3.1 細菌內毒素標準溶液配制
標準曲線所采用的內毒素濃度可以為0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或
0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀釋方法如下:取細菌內毒素工作標準品1
瓶,加入1ml細菌內毒素檢查用水,置旋渦混勻器上劇烈振搖15分鐘
(振搖過程不得濺出?。?。將上述內毒素溶液進一步用細菌內毒素檢查
用水稀釋為10EU/ml的內毒素溶液,再稀釋為1.0EU/ml的內毒素溶液。
以15EU/瓶為例:
(注:橫線上方為加入作為母液的內毒素溶液的量,下方為加
入細菌內毒素檢查用水的量)
 0.8ml CSE 0.2ml CSE
15EU/瓶 15EU/ml 10EU/ml 1EU/ml
 1ml TRW 0.4ml TRW 1.8ml TRW
以1.0EU/ml的內毒素溶液為母液按表1稀釋成0.1,0.25,0.5,1.0 
EU/ml的濃度梯度或以0.1EU/ml的內毒素溶液為母液按表2稀釋成0.01,
0.025,0.05,0.1EU/ml的濃度梯度。每稀釋一步均應在旋渦混勻器上
劇烈振搖至少30秒。稀釋的內毒素溶液靜置時間超過10分鐘,用前需在
旋渦混勻器上劇烈振搖1分鐘,配制好的內毒素標準溶液應在4小時內用
完。
1 2
max
EC64405:檢測區間為 0.1EU/ml~1.0EU/ml;
EC64405S:檢測區間為0.1EU/ml~1.0EU/ml或0.01EU/ml~0.1EU/ml
EC64405SS:檢測區間為0.1EU/ml~1.0EU/ml或0.01EU/ml~0.1EU/ml
 

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